細(xì)菌總數(shù)測(cè)定是測(cè)定水中需氧菌、兼性厭氧菌和異養(yǎng)菌的總數(shù)。本實(shí)驗(yàn)以1毫升水樣在營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中，于37攝氏度培養(yǎng)24小時(shí)后所生長(zhǎng)的細(xì)菌菌落的總數(shù)，作為水體受細(xì)菌污染程度的標(biāo)志。
工具與材料
培養(yǎng)皿，錐形瓶，移液管，燒杯，恒溫箱，高壓蒸汽滅菌鍋（圖3－1－20－1），pH試紙，酒精燈，放大鏡。
牛肉浸膏，蛋白胨，瓊脂，氯化鈉，5％鹽酸溶液，4％氫氧化鈉溶液。
活動(dòng)過(guò)程
1．采集水樣。
采集瓶預(yù)先在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌2小時(shí)，然后按《水樣的采集和保存》介紹的方法，采集2升水樣，蓋好瓶蓋保存。
2．培養(yǎng)基的配制。
稱取3克牛肉浸膏、10克蛋白胨、5克氯化鈉、20克瓊脂，加入到1升蒸餾水中，加熱、攪拌使之溶解，用鹽酸和氫氧化鈉將溶液pH值調(diào)節(jié)為7.0～7.2。
3．滅菌。
將培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、錐形瓶、燒杯、移液管等放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，滅菌20分鐘。
4．細(xì)菌總數(shù)的測(cè)定。
在點(diǎn)燃的酒精燈旁，用滅過(guò)菌的移液管吸取1毫升待測(cè)水樣，注入已滅菌的培養(yǎng)皿中，再注入約15毫升溫度約45攝氏度的液態(tài)培養(yǎng)基，旋搖培養(yǎng)皿，使水樣與培養(yǎng)基充分混合。同時(shí)做一個(gè)平行樣本。待培養(yǎng)基冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿，使底面向上，置于37攝氏度恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)。取出后用放大鏡觀察，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)。
5．將兩個(gè)培養(yǎng)皿中菌落數(shù)平均一下，計(jì)算1毫升水樣中的細(xì)菌總數(shù)。
說(shuō)明與延伸
1．若檢測(cè)自來(lái)水水樣，應(yīng)先將水龍頭用火焰灼燒3分鐘滅菌，然后打開(kāi)水龍頭，讓水流出5分鐘后取水樣。
2．計(jì)數(shù)時(shí)，對(duì)那些看來(lái)相似、距離很近但不相觸的菌落，應(yīng)一一計(jì)數(shù)。那些緊密接觸而外觀相異的菌落，也應(yīng)一一計(jì)數(shù)。
3．培養(yǎng)基上的菌落數(shù)超過(guò)300時(shí)，要對(duì)原水樣進(jìn)行稀釋。結(jié)果要以測(cè)出菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。
4．水樣采集后，應(yīng)立即檢驗(yàn)。如果放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，檢驗(yàn)結(jié)果比實(shí)際值偏大。
5．使用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌時(shí)，注意安全，以免被蒸汽灼傷。
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