細菌總數(shù)測定是測定水中需氧菌、兼性厭氧菌和異養(yǎng)菌的總數(shù)。本實驗以1毫升水樣在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中,于37攝氏度培養(yǎng)24小時后所生長的細菌菌落的總數(shù),作為水體受細菌污染程度的標志。
工具與材料
培養(yǎng)皿,錐形瓶,移液管,燒杯,恒溫箱,高壓蒸汽滅菌鍋(圖3-1-20-1),pH試紙,酒精燈,放大鏡。
牛肉浸膏,蛋白胨,瓊脂,氯化鈉,5%鹽酸溶液,4%氫氧化鈉溶液。
活動過程
1.采集水樣。
采集瓶預先在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)滅菌2小時,然后按《水樣的采集和保存》介紹的方法,采集2升水樣,蓋好瓶蓋保存。
2.培養(yǎng)基的配制。
稱取3克牛肉浸膏、10克蛋白胨、5克氯化鈉、20克瓊脂,加入到1升蒸餾水中,加熱、攪拌使之溶解,用鹽酸和氫氧化鈉將溶液pH值調(diào)節(jié)為7.0~7.2。
3.滅菌。
將培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、錐形瓶、燒杯、移液管等放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi),滅菌20分鐘。
4.細菌總數(shù)的測定。
在點燃的酒精燈旁,用滅過菌的移液管吸取1毫升待測水樣,注入已滅菌的培養(yǎng)皿中,再注入約15毫升溫度約45攝氏度的液態(tài)培養(yǎng)基,旋搖培養(yǎng)皿,使水樣與培養(yǎng)基充分混合。同時做一個平行樣本。待培養(yǎng)基冷卻凝固后,翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿,使底面向上,置于37攝氏度恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時。取出后用放大鏡觀察,統(tǒng)計菌落數(shù)。
5.將兩個培養(yǎng)皿中菌落數(shù)平均一下,計算1毫升水樣中的細菌總數(shù)。
說明與延伸
1.若檢測自來水水樣,應先將水龍頭用火焰灼燒3分鐘滅菌,然后打開水龍頭,讓水流出5分鐘后取水樣。
2.計數(shù)時,對那些看來相似、距離很近但不相觸的菌落,應一一計數(shù)。那些緊密接觸而外觀相異的菌落,也應一一計數(shù)。
3.培養(yǎng)基上的菌落數(shù)超過300時,要對原水樣進行稀釋。結(jié)果要以測出菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)。
4.水樣采集后,應立即檢驗。如果放置時間過長,檢驗結(jié)果比實際值偏大。
5.使用高壓蒸汽滅菌鍋進行滅菌時,注意安全,以免被蒸汽灼傷。
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