硝基苯類化合物主要存在于染料、炸藥和制革等工業(yè)廢水中，是有毒性的有機污染物。常見的硝基苯類化合物有硝基苯、二硝基苯、二硝基甲苯、三硝基甲苯等。
本實驗用還原偶氮光度法測定廢水中的硝基苯類（主要為一硝基和二硝基類）化合物。其原理是：在含硫酸銅的酸性溶液中，由鋅粉將硝基苯類化合物還原成苯胺類，經(jīng)重氮偶合反應(yīng)生成紫紅色染料，經(jīng)過比色，測定其含量。結(jié)果以硝基苯表示。
當測定還含有苯胺類化合物的廢水時，需測定2份樣品。一份不經(jīng)還原測苯胺類吸光度，一份將硝基苯類還原成苯胺類后測定總吸光度，在減去苯胺類吸光度后，計算出硝基苯類化合物的含量。
工具與材料
721型分光光度計，比色皿，具塞比色管，容量瓶，移液管，精密pH試紙，錐形瓶，分析天平，慢速濾紙。
濃鹽酸，鋅粉，硫酸氫鉀（粉末狀），10％硫酸銅溶液，10％氫氧化鈉溶液，5％亞硝酸鈉溶液，2.5％氨基磺酸鈉溶液，2％鹽酸萘乙二胺溶液。乙醇，硝基苯，2％硫酸。
活動過程
1．硝基苯標準溶液的配制。
取10毫升乙醇于25毫升容量瓶中，蓋緊瓶塞，精確稱量。加入2～3滴硝基苯，蓋緊瓶塞，重新稱量，計算加入硝基苯的質(zhì)量。用2％硫酸稀釋到標線，搖勻。計算出每毫升溶液中硝基苯的含量。使用前，再用2％硫酸稀釋，配制成硝基苯的質(zhì)量濃度為0.1000毫克／升的標準溶液。
2．校準曲線的繪制。
（1）吸取1.00毫升硝基苯溶液于50毫升錐形瓶中，加水20毫升，加入2毫升濃鹽酸，0.5克鋅粉，2滴硫酸銅溶液，搖勻。放置15分鐘后，用慢速濾紙過濾，濾液收集于50毫升容量瓶中，用水洗滌濾紙3次，洗滌液也移入容量瓶中，用水稀釋至標線，搖勻。
（2）吸取0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、10.00毫升上述溶液于25毫升比色管中，加水至10毫升，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至4～5，加水至標線，搖勻。再用硫酸氫鉀調(diào)節(jié)pH值至1.5～2.0，加1滴亞硝酸鈉溶液，搖勻，放置3分鐘后，加0.5毫升氨基磺酸鈉溶液，再放置3分鐘。待氣泡除盡后，加入1毫升鹽酸萘乙二胺，搖勻，放置。
（3）30分鐘后，用10毫米比色皿，于545納米波長處，以水為參比，測定吸光度，結(jié)果填入下表。
表3－1－35－1 校正曲線的繪制
注：A0即管號為0的溶液的吸光度。
（4）根據(jù)表內(nèi)數(shù)據(jù)，以校正吸光度為縱坐標，硝基苯質(zhì)量為橫坐標，繪制校準曲線。
3．水樣的測定。
（1）取適量水樣（硝基苯和苯胺的總吸光度不超過0.5）于錐形瓶中，加水至20毫升，加2毫升濃鹽酸，0.5克鋅粉，2滴硫酸銅溶液，搖勻。放置15分鐘后，過濾并將濾液轉(zhuǎn)移至50毫升容量瓶中，用水洗滌錐形瓶和濾紙3次，洗滌液也移入容量瓶，用水稀釋至標線，搖勻。
（2）另取與上述相同體積的水樣于50毫升容量瓶中，加2毫升濃鹽酸、2滴硫酸銅溶液，加水至標線，混勻。
（3）分取上述兩種溶液各10.00毫升，分別置于25毫升比色管中，按照與繪制校準曲線相同的步驟，測定吸光度。各減去零濃度空白液的吸光度（表中A0）后，得出硝基苯類化合物的吸光度和苯胺類化合物的吸光度。
（4）根據(jù)硝基苯類吸光度減去苯胺類吸光度后的數(shù)值，從校準曲線上查得硝基苯的質(zhì)量，根據(jù)下式計算水樣中一硝基和二硝基類化合物的含量：
：水樣中一硝基和二硝基類化合物的質(zhì)量濃度（毫克／升）
m：由硝基苯類吸光度減去苯胺類吸光度后，從校準曲線上查得的硝基苯的質(zhì)量（毫克）
V：水樣體積（毫升）
說明與延伸
1．測定時，應(yīng)避免陽光直射和強光照射。
2．當水樣中不含有苯胺類化合物時，水樣測定步驟（2）可略去。
3．采集水樣后，用硫酸調(diào)至pH值為1～2，并在4攝氏度以下保存。
4．本方法最適宜的顯色溫度在22～30攝氏度之間，當?shù)陀诖藴囟葧r，校準曲線繪制與水樣測定必須同時進行。
5．由于水樣酸化與否對苯胺類測得值有影響，因此測定水樣時的步驟（1）、（2）要同時進行，同時加鹽酸及硫酸銅溶液，同時比色。
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